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先进实验室和顶尖设备

 

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  • 研究和发展

           在香港有自己的化验所,拥有自己的研发团队,提供技术支持 

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           将聚合酶链反应(PCR)和次世代定序仪(NGS)等技术应用于新的测试程序

 

历史悠久和经验丰富

 

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PCR聚合酶链反应

发表时间: 2024-07-18 09:27:36

作者: 香港达雅高化验所

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    聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种广泛应用的DNA突变检测技术,也被视为最基础的方法之一。PCR的作用是在几小时内高度扩增DNA或RNA分子,将其增加到数百万倍以上,以便直接检测和分析特定基因序列,而无需进行DNA印迹或RNA印迹分析的繁琐过程。PCR技术使得只需要极少细胞数量即可进行分析,因此避免了大量DNA或RNA样本的提取过程。

     

   PCR的原理基于一对人工合成的寡聚核苷酸引物,这对引物能与目标DNA双链序列特异地配对。在耐热DNA聚合酶(Taq)的作用下,PCR能够通过循环进行热变性、引物复性和延伸的过程,将目标DNA片段倍增(见下图)。通过多次循环反应,目标序列的拷贝数会呈指数级增长,达到10^6~7数量级。PCR的操作流程如下所示:首先,将PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、引物混合液、基因组DNA模板和ddH2O加入Eppendorf反应管中。然后,在预设的PCR仪上进行反应,包括以下步骤:95℃变性3分钟(第一轮循环);95℃变性30秒;56℃复性30秒;72℃延伸30秒;72℃延伸10分钟(最后一轮循环)。循环反应30轮(需要根据靶DNA序列长度和引物序列的不同来调整复性温度和时间)。反应结束后,取少许反应液进行琼脂糖凝胶电泳,以确认是否得到目的PCR产物。此外,还可以通过DNA染色后,将PCR产物条带的浓度与分子量标志(marker)条带的浓度进行比较,从而估算出大致的DNA量。


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